PRELI Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411975-ACT

Il gene umano **PRELID1** codifica **PRELI**, una proteina dello spazio intermembrana mitocondriale implicata nel mantenimento dell’omeostasi dei fosfolipidi mitocondriali e dell’integrità della membrana interna. PRELI agisce all’interno di vie di trasferimento lipidico di tipo PRELI-like che sostengono l’organizzazione di membrana legata alla cardiolipina, l’efficienza della fosforilazione ossidativa e la dinamica mitocondriale, influenzando apoptosi e adattamento allo stress. Accoppiando la gestione dei lipidi alle prestazioni della catena respiratoria, PRELI contribuisce al metabolismo energetico cellulare e all’equilibrio redox. Le alterazioni della composizione lipidica mitocondriale e della segnalazione di stress bioenergetico associate alla deregolazione di PRELID1 sono rilevanti per studi meccanicistici della disfunzione mitocondriale osservata nella biologia dei tumori e in fenotipi associati alla neurodegenerazione.

PRELI Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRELID1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRELI Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRELID1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRELID1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRELI. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRELID1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRELI nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRELI nelle cellule tumorali con espressione di PRELID1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.