Plásmido CRISPR de Activación (h) prefoldin 4: sc-416619-ACT

PFDN4 codifica prefoldina 4, una subunidad del complejo cocaperona prefoldina que captura polipéptidos nacientes o desplegados y los entrega a la chaperonina TRiC/CCT para un plegamiento productivo. Esta actividad sostiene la proteostasis del citoesqueleto al facilitar la maduración de actina y tubulina y ayuda a mantener la homeostasis proteica bajo estrés celular. A través de su papel en el plegamiento mediado por chaperonas, PFDN4 contribuye a vías que regulan la progresión del ciclo celular, las redes de proteostasis y la señalización de respuesta al estrés. La disfunción de las chaperonas y los cambios en la actividad del complejo prefoldina se han vinculado con el desequilibrio de la proteostasis observado en contextos de investigación sobre cáncer y neurodegeneración.

prefoldin 4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PFDN4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

prefoldin 4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PFDN4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PFDN4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de prefoldin 4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PFDN4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de prefoldin 4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía prefoldin 4 en células tumorales con expresión de PFDN4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.