PRDM6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406414-ACT

PRDM6 codifica un regolatore trascrizionale contenente un dominio PR/SET che modula lo stato della cromatina e i programmi di espressione genica legati alla specificazione della linea muscolare liscia e all’omeostasi vascolare. Influenzando la repressione epigenetica e le reti trascrizionali associate alla differenziazione, PRDM6 contribuisce a coordinare la progressione del ciclo cellulare e il passaggio fenotipico nelle cellule di tipo muscolare liscio. Un’attività di PRDM6 deregolata è stata associata ad alterazioni dello sviluppo e del rimodellamento vascolare, rendendolo rilevante per studi di biologia cardiovascolare e di contesti di segnalazione proliferativa. La sua funzione regolatoria nucleare rende PRDM6 un nodo utile per analizzare il controllo, dipendente dalla cromatina, della differenziazione di linea e della trascrizione responsiva allo stress.

PRDM6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRDM6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRDM6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRDM6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRDM6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRDM6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRDM6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRDM6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRDM6 nelle cellule tumorali con espressione di PRDM6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.