Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRDM1/Blimp-1: sc-400585-ACT

PRDM1, qui code le répresseur transcriptionnel PRDM1/Blimp-1, est un régulateur maître des programmes de différenciation terminale du système immunitaire, notamment la formation des plasmocytes et les décisions de destinée des lymphocytes T effecteurs. Il intègre les signaux des cytokines et des récepteurs d’antigène afin de remodeler la chromatine et de réprimer les gènes de lignage alternatifs, coordonnant des voies qui contrôlent la prolifération, l’apoptose et l’adaptation métabolique. L’activité de PRDM1/Blimp-1 contribue également au maintien des états immunitaires résidents des tissus et à la régulation de l’expression des gènes inflammatoires. Une expression ou une fonction dérégulée de PRDM1 est impliquée dans des dysfonctionnements immunitaires et dans la biologie de maladies hématologiques, notamment via une maturation altérée des lymphocytes B et des circuits transcriptionnels perturbés dans des contextes associés aux lymphomes.

PRDM1/Blimp-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRDM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRDM1/Blimp-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRDM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRDM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRDM1/Blimp-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRDM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRDM1/Blimp-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRDM1/Blimp-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRDM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.