PPM1H Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435618

Panoramica

Ppm1h codifica PPM1H, una fosfatasi Ser/Thr della famiglia PP2C dipendente da Mg2+/Mn2+ che modula l’output di segnalazione defosforilando proteine bersaglio coinvolte nelle risposte allo stress cellulare e nel controllo della crescita. Attraverso l’attenuazione delle vie delle chinasi mediata dalla fosfatasi, PPM1H contribuisce alla regolazione dell’omeostasi della fosforilazione, influenzando la progressione del ciclo cellulare, la sopravvivenza e i programmi di differenziamento. Nei sistemi murini, PPM1H è stata utilizzata per indagare come l’attività fosfatasica plasmi la dinamica delle vie di segnalazione e i fenotipi specifici di tessuto, fornendo collegamenti meccanicistici tra reti di fosforilazione alterate e tratti complessi. Una segnalazione fosfatasica deregolata è ampiamente rilevante in modelli di segnalazione oncogenica, infiammazione e neurobiologia, rendendo Ppm1h un nodo utile per studiare il rimodellamento delle vie e le relazioni genotipo–fenotipo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PPM1H (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppm1h in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppm1h insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppm1h a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PPM1H.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppm1h per lo studio della segnalazione di PPM1H, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ppm1h critici per la funzione di PPM1H
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppm1h per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PPM1H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PPM1H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppm1h. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PPM1H Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PPM1H (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppm1h per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppm1h definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.