PPM1H Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412800

Panoramica

PPM1H codifica la fosfatasi proteica 1H dipendente da Mg2+/Mn2+, una fosfatasi serina/treonina della famiglia PP2C che controbilancia la segnalazione mediata dalle chinasi defosforilando proteine bersaglio coinvolte nell’omeostasi cellulare. Attraverso la regolazione di vie dipendenti dalla fosforilazione, PPM1H è stata collegata al controllo della proliferazione cellulare, delle risposte allo stress e della proteostasi, inclusi processi che influenzano il traffico endosomiale e il turnover proteico. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di PPM1H possono modificare la dinamica delle reti di segnalazione e sono state esplorate nel contesto del rimodellamento della fosfo-segnalazione associato al cancro e di altri disturbi in cui è compromesso l’equilibrio tra fosfatasi e chinasi. Di conseguenza, PPM1H rappresenta un nodo utile per studi meccanicistici su fenotipi guidati dalla fosforilazione e sul crosstalk tra vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PPM1H (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PPM1H in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PPM1H insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PPM1H a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PPM1H.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PPM1H per lo studio della segnalazione di PPM1H, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PPM1H critici per la funzione di PPM1H
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PPM1H per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PPM1H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PPM1H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PPM1H. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PPM1H Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PPM1H (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PPM1H per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PPM1H definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.