PPARγ Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422363-LAC

Il gene murino **Pparg** codifica il recettore gamma attivato dai proliferatori dei perossisomi (PPARγ), un recettore nucleare attivato da ligando che funziona da fattore di trascrizione e regola la differenziazione degli adipociti, l’accumulo di lipidi e il metabolismo del glucosio sensibile all’insulina. PPARγ forma eterodimeri con RXR e si lega agli elementi di risposta a PPAR per coordinare programmi genici coinvolti nell’assorbimento degli acidi grassi, nella sintesi dei trigliceridi e nella segnalazione mediata dalle adipokine. Questo regolatore integra segnali nutrizionali e infiammatori, collegando l’omeostasi metabolica alla modulazione immunitaria attraverso il crosstalk con vie come NF-κB e MAPK. L’attività deregolata di **Pparg** è ampiamente studiata nella disfunzione metabolica associata all’obesità, nei fenotipi di steatosi epatica, nella polarizzazione dei macrofagi e nel rimodellamento legato alla fibrosi in diversi tessuti.

Le particelle di attivazione lentivirale PPARγ (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Pparg in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PPARγ (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Pparg, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PPARγ. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Pparg e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.