PPARγ Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400030-LAC

PPARG codifica il recettore gamma attivato dai proliferatori dei perossisomi (PPARγ), un recettore nucleare attivato da ligandi che forma eterodimeri con RXR per regolare la trascrizione a livello degli elementi di risposta ai PPAR. PPARγ è un regolatore centrale dell’adipogenesi, dell’assorbimento e dell’immagazzinamento dei lipidi, dell’omeostasi del glucosio e di programmi trascrizionali antinfiammatori, integrando segnali provenienti da acidi grassi ed eicosanoidi. Modula vie metaboliche e immunitarie, tra cui la segnalazione dell’insulina, il metabolismo degli acidi grassi e la polarizzazione dei macrofagi, con ampi effetti sulla differenziazione cellulare e sul bilancio energetico. La deregolazione dell’attività di PPARG è implicata nelle caratteristiche della sindrome metabolica, nella resistenza all’insulina, nella biologia della steatosi epatica non alcolica e nell’infiammazione associata al microambiente tumorale, rendendolo un nodo ampiamente studiato nella ricerca su immunometabolismo e metabolismo del cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale PPARγ (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PPARG in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PPARγ (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PPARG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PPARγ. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PPARG e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.