PPARγ Plasmide Double Nickase (h): sc-400030-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PPARγ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PPARγ Double Nickase Plasmid (h) e il PPARγ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PPARG. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PPARγ Antibody (E-8): sc-7273
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PPARγ Plasmide Double Nickase (h) | sc-400030-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PPARγ Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400030-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPARG codifica il recettore gamma attivato dai proliferatori dei perossisomi (PPARγ), un recettore nucleare attivato da ligando che forma un eterodimero con RXR per regolare programmi trascrizionali che controllano l’adipogenesi, l’assorbimento e l’immagazzinamento dei lipidi e la sensibilità all’insulina. PPARγ integra segnali metabolici e infiammatori modulando vie quali il metabolismo degli acidi grassi, l’omeostasi del glucosio e la polarizzazione dei macrofagi, influenzando la segnalazione delle citochine e il rimodellamento tissutale. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di PPARG sono associate a disfunzioni metaboliche, tra cui obesità, insulino-resistenza e dislipidemia, e vengono studiate anche in contesti come la steatosi epatica e i disturbi infiammatori. Poiché funge da hub trascrizionale, PPARG è spesso analizzato per mappare le reti di regolazione genica e le transizioni di stato metabolico in modelli cellulari umani.
PPARγ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PPARG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PPARG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PPARG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PPARG interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.