PPARα Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400238-LAC

PPARA codifica il recettore attivato dai proliferatori dei perossisomi di tipo alfa (PPARα), un recettore nucleare attivato da ligando che regola programmi trascrizionali coinvolti nel controllo dell’assorbimento dei lipidi, della β-ossidazione mitocondriale e perossisomiale e della chetogenesi. PPARα funziona come eterodimero con RXR e si lega agli elementi di risposta ai PPAR per coordinare l’adattamento metabolico durante il digiuno e in condizioni di elevato flusso di acidi grassi, integrando segnali provenienti da acidi grassi ed eicosanoidi. Interagisce con vie che governano il metabolismo delle lipoproteine, l’omeostasi degli acidi biliari e l’espressione genica infiammatoria tramite crosstalk con NF-κB e altri regolatori trascrizionali. Una segnalazione di PPARα deregolata è stata implicata in stati di disfunzione metabolica, inclusi dislipidemia e fenotipi di fegato grasso, ed è spesso studiata nel contesto delle risposte allo stress cardiometabolico.

Le particelle di attivazione lentivirale PPARα (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PPARA in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PPARα (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PPARA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PPARα. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PPARA e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.