POMC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400592

Panoramica

POMC (proopiomelanocortina) codifica un pro-ormone secretorio che viene processato proteoliticamente in molteplici peptidi bioattivi, tra cui ACTH e gli ormoni stimolanti i melanociti, che coordinano la segnalazione endocrina dello stress, l’omeostasi energetica, la pigmentazione e la nocicezione. Nei corticotropi ipofisari, l’ACTH derivato da POMC promuove la steroidogenesi surrenalica tramite vie dipendenti dai recettori delle melanocortine, collegando l’attività dell’asse ipotalamo–ipofisi–surrene alle risposte metaboliche e immunitarie sistemiche. Il processamento di POMC dipende dal traffico lungo la via secretoria regolata e dalle convertasi dei pro-ormoni, integrandosi con la segnalazione cAMP/PKA e con programmi di differenziamento neuroendocrino. La disregolazione o la perdita di funzione di POMC è associata a disturbi della funzione surrenalica, fenotipi di obesità e iperfagia e a un’alterata segnalazione melanocortinica, rilevante per la ricerca neuroendocrina e metabolica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO POMC (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POMC in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POMC insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POMC a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina POMC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POMC per lo studio della segnalazione di POMC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni POMC critici per la funzione di POMC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POMC per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal POMC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal POMC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POMC. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal POMC Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR POMC (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POMC per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POMC definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.