POLR3B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406739

Panoramica

POLR3B codifica la seconda subunità più grande dell’RNA polimerasi III, un enzima multisubunità responsabile della trascrizione di piccoli RNA non codificanti, inclusi i tRNA, l’rRNA 5S e altri RNA corti necessari per la traduzione e la crescita cellulare. Attraverso la regolazione dell’output di Pol III, POLR3B influenza la biogenesi dei ribosomi, la proteostasi e l’adattamento metabolico, integrando i segnali sensibili a nutrienti e stress con la capacità biosintetica. L’alterazione della trascrizione da parte di Pol III influisce sul riconoscimento immunitario innato degli acidi nucleici citosolici e su una più ampia omeostasi trascrizionale sia in stati cellulari proliferativi sia differenziati. Varianti patogene in POLR3B sono associate ai disturbi dello spettro delle leucodistrofie correlate a Pol III e a fenotipi di neurosviluppo, rendendolo un gene chiave per lo studio della disfunzione dei macchinari trascrizionali nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO POLR3B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POLR3B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POLR3B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POLR3B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina POLR3B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POLR3B per lo studio della segnalazione di POLR3B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni POLR3B critici per la funzione di POLR3B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POLR3B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal POLR3B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal POLR3B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POLR3B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal POLR3B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR POLR3B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POLR3B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POLR3B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.