POGZ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410566-ACT

POGZ (proteina derivata da elementi trasponibili pogo con dito di zinco) è un fattore nucleare associato alla cromatina che regola programmi trascrizionali coordinando il legame al DNA e le interazioni proteina–proteina nelle regioni regolatorie dei geni. Contribuisce all’organizzazione della cromatina e alla stabilità del genoma influenzando la progressione mitotica e la coesione tra cromatidi fratelli tramite interazioni con macchinari associati all’eterocromatina, con effetti sul controllo del ciclo cellulare e sulle reti di espressione genica dello sviluppo. La disregolazione della regolazione della cromatina dipendente da POGZ è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e ad alterazioni della differenziazione neuronale, rendendola rilevante per gli studi sul controllo della trascrizione nello sviluppo cerebrale. Nelle cellule umane, POGZ viene spesso esaminata nel contesto della regolazione epigenetica, della specificazione del destino cellulare e degli effetti a livello di via sui programmi di espressione dell’RNA.

POGZ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di POGZ senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

POGZ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus POGZ nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione POGZ, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di POGZ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus POGZ nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da POGZ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via POGZ nelle cellule tumorali con espressione di POGZ silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.