Plásmido Doble Nickase (h) POGK: sc-412865-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)POGK consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa POGK (h) y el plásmido de doble nickasa POGK (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a POGK. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: POGK Anticuerpo (F-1): sc-515752
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) POGK | sc-412865-NIC | 20 µg | $410.00 |
POGK (elemento transponible pogo derivado con dominio KRAB) codifica una proteína nuclear derivada de una transposasa tipo pogo y se cree que contribuye a la regulación del estado de la cromatina y de la transcripción mediada por la unión al ADN. La presencia de un dominio KRAB sugiere un posible reclutamiento de complejos correpresores asociados a KAP1/TRIM28, lo que vincula a POGK con la formación de heterocromatina y el control epigenético de la expresión génica. La regulación alterada de factores que contienen KRAB es ampliamente relevante para la estabilidad del genoma, los programas de desarrollo y las transiciones de estado celular, lo que convierte a POGK en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la represión transcripcional y la organización de la cromatina. Investigar la perturbación de POGK puede ayudar a aclarar cómo las proteínas derivadas de transposasas se reutilizan dentro de las redes reguladoras humanas y cómo estos mecanismos se entrecruzan con la desregulación transcripcional asociada a enfermedades.
POGK El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus POGK en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de POGK. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de POGK. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con POGK alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.