POGK Plasmide Double Nickase (h): sc-412865-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- POGK Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il POGK Double Nickase Plasmid (h) e il POGK Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira POGK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: POGK Antibody (F-1): sc-515752
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
POGK Plasmide Double Nickase (h) | sc-412865-NIC | 20 µg | $410.00 |
POGK (pogo transposable element derived with dominio KRAB) codifica una proteina nucleare derivata da una trasposasi di tipo pogo e si ritiene contribuisca alla regolazione dello stato della cromatina e della trascrizione mediata dal legame al DNA. La presenza di un dominio KRAB suggerisce il potenziale reclutamento di complessi corepressori associati a KAP1/TRIM28, collegando POGK alla formazione di eterocromatina e al controllo epigenetico dell’espressione genica. Un’alterata regolazione dei fattori contenenti KRAB è ampiamente rilevante per la stabilità del genoma, i programmi di sviluppo e le transizioni di stato cellulare, rendendo POGK un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla repressione trascrizionale e sull’organizzazione della cromatina. L’indagine della perturbazione di POGK può aiutare a chiarire come le proteine derivate da trasposasi vengano riutilizzate nelle reti regolatorie umane e come questi meccanismi si intersechino con la disregolazione trascrizionale associata alle malattie.
POGK Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus POGK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di POGK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di POGK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con POGK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.