Podocin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400930

Panoramica

NPHS2 codifica la podocina, una proteina essenziale del diaframma di filtrazione nelle cellule podocitarie umane, che funge da piattaforma di scaffolding per complessi di segnalazione a livello della barriera di filtrazione glomerulare. La podocina interagisce con nefrina e CD2AP e contribuisce a organizzare microdomini di lipid raft, sostenendo la dinamica del citoscheletro, la meccanosensibilità e il mantenimento dell’architettura dei pedicelli. L’alterazione di NPHS2 compromette l’integrità del diaframma di filtrazione e modifica le vie di segnalazione dei podociti legate al rimodellamento dell’actina e alla sopravvivenza cellulare. Difetti genetici e funzionali della podocina sono fortemente associati a nefropatie proteinuriche, tra cui la sindrome nefrosica resistente agli steroidi e la glomerulosclerosi segmentaria e focale, rendendo NPHS2 un bersaglio chiave per modellare la disfunzione della barriera glomerulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Podocin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NPHS2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NPHS2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NPHS2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Podocin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NPHS2 per lo studio della segnalazione di Podocin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NPHS2 critici per la funzione di Podocin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NPHS2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Podocin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Podocin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NPHS2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Podocin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Podocin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NPHS2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NPHS2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.