Podocin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400930

Visão geral

NPHS2 codifica a podocina, uma proteína essencial do diafragma de fenda em podócitos humanos, que serve de plataforma para complexos de sinalização na barreira de filtração glomerular. A podocina interage com a nefrina e com o CD2AP e ajuda a organizar microdomínios de balsas lipídicas (lipid rafts), sustentando a dinâmica do citoesqueleto, a mecanossensação e a manutenção da arquitetura dos processos podais. A desregulação de NPHS2 compromete a integridade do diafragma de fenda e altera vias de sinalização dos podócitos ligadas à remodelação de actina e à sobrevivência celular. Defeitos genéticos e funcionais na podocina estão fortemente associados a doença renal proteinúrica, incluindo síndrome nefrótica resistente a esteroides e glomeruloesclerose segmentar e focal, tornando NPHS2 um alvo-chave para modelar disfunções da barreira glomerular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Podocin (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene NPHS2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do NPHS2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do NPHS2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Podocin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de NPHS2 para a investigação da sinalização de Podocin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) NPHS2 críticos para a função Podocin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos NPHS2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Podocin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Podocin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus NPHS2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Podocin Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Podocin (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia NPHS2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo NPHS2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.