Podocalyxin-like 1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400317-ACT

PODXL codifica la podocalixina-like 1, una sialomucina della famiglia CD34 fortemente glicosilata, localizzata sulla superficie apicale degli epiteli polarizzati e dell’endotelio vascolare. Grazie alle sue proprietà antiadesive e alle interazioni con i connettori dell’actina NHERF/ezrin, PODXL contribuisce alla forma cellulare, alla formazione del lume e alla regolazione dell’equilibrio tra adesione e motilità, influenzando l’organizzazione del citoscheletro e i programmi di polarità epiteliale. La podocalixina-like 1 è stata implicata in processi associati alla transizione epitelio-mesenchimale, alla migrazione e all’invasione, e l’alterazione della sua espressione viene frequentemente valutata in studi sulla progressione tumorale e sui fenotipi metastatici. Nel rene, PODXL è un marcatore chiave dei podociti ed è rilevante per l’integrità della barriera glomerulare e per la morfodinamica dei podociti.

Podocalyxin-like 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PODXL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Podocalyxin-like 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PODXL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PODXL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Podocalyxin-like 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PODXL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Podocalyxin-like 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Podocalyxin-like 1 nelle cellule tumorali con espressione di PODXL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.