PMCA4 Plasmide Double Nickase (h): sc-402888-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PMCA4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PMCA4 Double Nickase Plasmid (h) e il PMCA4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATP2B4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PMCA4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402888-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PMCA4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402888-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP2B4 codifica la Ca2+-ATPasi 4 della membrana plasmatica (PMCA4), un’ATPasi di tipo P che espelle il Ca2+ citosolico per mantenere l’omeostasi del calcio e modulare ampiezza e durata della segnalazione Ca2+-dipendente. PMCA4 regola microdomini localizzati di Ca2+ che influenzano processi quali l’accoppiamento eccitazione–contrazione, la segnalazione dell’ossido nitrico e programmi trascrizionali Ca2+-dipendenti. Controllando la rimozione del Ca2+ a livello della membrana plasmatica, PMCA4 si integra con vie che includono la regolazione dipendente dalla calmodulina e reti a valle di chinasi/fosfatasi che modulano motilità cellulare, secrezione e proliferazione. Varianti genetiche o alterazioni dell’espressione di ATP2B4 sono state associate a fenotipi legati alla biologia degli eritrociti e alla funzione vascolare, a supporto della sua rilevanza in studi meccanicistici della fisiologia cellulare guidata dal calcio.
PMCA4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP2B4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP2B4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP2B4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP2B4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.