PMCA3 Plasmide Double Nickase (h): sc-404464-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PMCA3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PMCA3 Double Nickase Plasmid (h) e il PMCA3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATP2B3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PMCA3 Antibody (G-6): sc-390148
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PMCA3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404464-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PMCA3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404464-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ATP2B3 umano codifica l’ATPasi 3 trasportatrice di Ca2+ della membrana plasmatica (PMCA3), un’ATPasi di tipo P che esporta il Ca2+ citosolico per mantenere bassi i livelli basali di calcio e modulare i transitori di Ca2+ evocati dagli stimoli. Ripristinando l’omeostasi del Ca2+ dopo gli eventi di segnalazione, PMCA3 contribuisce a regolare processi dipendenti dal calcio, tra cui eccitabilità, secrezione, risposte trascrizionali e vie di sopravvivenza cellulare. L’attività di PMCA3 si interseca funzionalmente con la regolazione mediata dalla calmodulina e con reti più ampie di segnalazione del Ca2+, come le vie calcineurina/NFAT e quelle mediate da CaMK. L’alterazione genetica o l’espressione anomala di ATP2B3 è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e neurologici, a sostegno della sua rilevanza per studi meccanicistici dei difetti nella gestione del calcio.
PMCA3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP2B3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP2B3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP2B3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP2B3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.