PLP-J Plasmide di attivazione CRISPR (m2): sc-424243-ACT-2

Il gene murino Prl3c1 codifica PLP-J, un membro della famiglia della prolattina, proteina secreta arricchita nella placenta e implicata nella biologia dell’interfaccia materno-fetale e nella regolazione endocrina durante la gestazione. PLP-J viene studiata nel contesto delle reti di segnalazione della prolattina e del lattogeno placentare, influenzando la differenziazione del trofoblasto, il rimodellamento deciduale e il dialogo tra tessuti riproduttivi che coordina l’impianto e lo sviluppo placentare. La disregolazione dell’espressione dei geni della famiglia della prolattina è associata a placentazione anomala e a fisiopatologie correlate alla gravidanza, rendendo Prl3c1 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici dei disturbi riproduttivi. L’editing genico mirato su Prl3c1 e i saggi funzionali supportano applicazioni in modelli murini per indagare la segnalazione placentare, la specificazione di linea cellulare e i programmi trascrittomici che controllano l’adattamento alla gravidanza.

PLP-J Il plasmide di attivazione CRISPR (m2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Prl3c1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PLP-J Il plasmide di attivazione CRISPR (m2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Prl3c1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Prl3c1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PLP-J. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Prl3c1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PLP-J nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PLP-J nelle cellule tumorali con espressione di Prl3c1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.