Plfr Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422306-LAC

Prl7d1 codifica la proteina murina della famiglia della prolattina 7, sottofamiglia d, membro 1 (Plfr), un fattore secreto di tipo citochinico associato principalmente ai tessuti riproduttivi e alla biologia placentare. In quanto parte della famiglia genica della prolattina, espansa nei roditori, Plfr è collegata a una comunicazione endocrina-paracrina che sostiene la differenziazione del trofoblasto, il rimodellamento dell’interfaccia utero-placentare e gli adattamenti materno-fetali. La segnalazione della famiglia della prolattina interseca programmi trascrizionali regolati da JAK/STAT e processi infiammatori e metabolici più ampi che plasmano la fisiologia della gravidanza. L’alterazione dell’espressione dei geni placentari della famiglia della prolattina è spesso studiata, nei modelli murini, nel contesto di fallimento dell’impianto, insufficienza placentare, restrizione della crescita fetale e disregolazione metabolica materna.

Le particelle di attivazione lentivirale Plfr (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Prl7d1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Plfr (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Prl7d1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Plfr. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Prl7d1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.