plexin-B2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431226

Panoramica

Plxnb2 codifica la plexina-B2, un recettore transmembrana per le semaforine di classe 4 che integra segnali di guida con il rimodellamento del citoscheletro e la motilità cellulare. La segnalazione mediata da plexina-B2 influenza l’attività delle GTPasi della famiglia Rho e interagisce con le vie dei recettori tirosin-chinasici per coordinare adesione, migrazione e morfogenesi durante lo sviluppo neurale e l’organizzazione dei tessuti. Nei modelli murini, la funzione di Plxnb2 è spesso studiata nella guida assonale, nella ramificazione epiteliale e nella regolazione delle interazioni cellula–cellula nei tessuti in sviluppo e in quelli adulti. Una segnalazione semaforina–plexina disregolata è stata associata a fenotipi anomali di migrazione e invasione in contesti rilevanti per la malattia, a supporto della sua utilità come nodo meccanicistico in vie che controllano l’architettura tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO plexin-B2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Plxnb2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Plxnb2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Plxnb2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina plexin-B2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Plxnb2 per lo studio della segnalazione di plexin-B2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Plxnb2 critici per la funzione di plexin-B2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Plxnb2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal plexin-B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal plexin-B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Plxnb2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal plexin-B2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR plexin-B2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Plxnb2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Plxnb2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.