Plasmide CRISPR/Cas9 KO PLC β1 (h): sc-401141

Présentation

PLCB1 code la phospholipase C bêta 1 (PLCβ1), une enzyme effectrice régulée par les protéines G qui hydrolyse le phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate pour générer l’inositol 1,4,5-trisphosphate et le diacylglycérol, mobilisant ainsi le Ca2+ intracellulaire et activant la signalisation de la protéine kinase C. Cette voie intègre des signaux issus des RCPG (récepteurs couplés aux protéines G) afin de réguler des processus variés, notamment l’excitabilité neuronale, la transmission synaptique, la sécrétion et la dynamique du cytosquelette. L’activité de PLCβ1 contribue à l’activation en aval des programmes MAPK et de transcription dépendants du calcium, reliant la signalisation des récepteurs membranaires à des modifications de l’expression génique et de l’état cellulaire. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de PLCB1 ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et à une signalisation anormale du contrôle de la croissance, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de la transduction du signal et dans des modèles cellulaires pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PLC β1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PLCB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PLCB1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PLCB1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PLC β1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PLCB1 pour l'étude de la signalisation de PLC β1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PLCB1 essentiels à la fonction de PLC β1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PLCB1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PLC β1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PLC β1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PLCB1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PLC β1 plasmide HDR (h) et le PLC β1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PLCB1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PLCB1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.