Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PLC β1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401141
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PLC β1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PLC β1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PLC β1 Antibody (D-8): sc-5291
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PLC β1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401141 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
PLCB1 codifica la fosfolipasi C beta 1 (PLCβ1), un enzima effettore regolato dalle proteine G che idrolizza il fosfatidilinositolo 4,5-bisfosfato generando inositolo 1,4,5-trisfosfato e diacilglicerolo, mobilizzando così il Ca2+ intracellulare e attivando la segnalazione della protein chinasi C. Questa via integra input provenienti dai GPCR per regolare diversi processi, tra cui l’eccitabilità neuronale, la segnalazione sinaptica, la secrezione e la dinamica del citoscheletro. L’attività di PLCβ1 contribuisce a programmi trascrizionali a valle mediati da MAPK e dipendenti dal calcio, collegando la segnalazione dei recettori di membrana a cambiamenti nell’espressione genica e nello stato cellulare. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di PLCB1 sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e a una segnalazione anomala del controllo della crescita, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici della trasduzione del segnale e in modelli cellulari rilevanti per la malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PLC β1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PLCB1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PLCB1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PLCB1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PLC β1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PLCB1 per lo studio della segnalazione di PLC β1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PLCB1 critici per la funzione di PLC β1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PLCB1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PLC β1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PLC β1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PLCB1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PLC β1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PLC β1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PLCB1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PLCB1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.