plakophilin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422275

概要

Pkp1は、アルマジロリピートをもつタンパク質であるプラコフィリン1をコードしており、デスモソームの中核構成要素として機能する。デスモソームカドヘリンを中間径フィラメントネットワークにつなぐことで、上皮細胞同士の接着と組織の完全性を支える。マウスでは、プラコフィリン1はデスモソームの組み立てと安定化に寄与し、接着結合のリモデリングを細胞骨格の構築およびメカノトランスダクションと協調させる。PKP1依存的な接着が攪乱されると、表皮バリア形成やストレス耐性に影響が及ぶ。これらは皮膚および重層上皮の生物学で頻繁に研究される過程である。デスモソーム機能不全は分化、創傷応答、上皮の恒常性にも影響するため、Pkp1は接着関連病態や接着結合シグナル伝達ネットワークの解明において重要な標的となる。

plakophilin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPkp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pkp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pkp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、plakophilin 1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、plakophilin 1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pkp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• plakophilin 1の機能に不可欠なPkp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pkp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• plakophilin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびplakophilin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pkp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  plakophilin 1 HDRプラスミド（m）および plakophilin 1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPkp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPkp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。