PLAC8 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-405093-LAC

PLAC8 (placenta-associated 8), noto anche come Onzin, codifica una piccola proteina ricca di cisteina coinvolta nella regolazione della differenziazione cellulare, dell’omeostasi epiteliale e della segnalazione di risposta allo stress. Nelle cellule umane, PLAC8 è stato associato alla modulazione di programmi di proliferazione e sopravvivenza, inclusi percorsi legati agli output di segnalazione MAPK e PI3K/AKT, nonché a processi connessi all’organizzazione del citoscheletro e alla dinamica delle membrane. Un’espressione alterata di PLAC8 è stata riportata in molteplici contesti tumorali e stati infiammatori, dove correla con variazioni dell’invasività, dell’adattamento metabolico e di fenotipi associati al sistema immunitario. Queste caratteristiche rendono PLAC8 un bersaglio utile per analizzare le reti trascrizionali che controllano le decisioni di destino di linea e i comportamenti cellulari responsivi al microambiente.

Le particelle di attivazione lentivirale PLAC8 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PLAC8 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PLAC8 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PLAC8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PLAC8. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PLAC8 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.