PKR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (rabbit): sc-437324

Panoramica

PKR (EIF2AK2) è una chinasi serina/treonina inducibile dagli interferoni che riconosce l’RNA a doppio filamento e coordina le difese antivirali innate. Una volta attivata, PKR fosforila eIF2α per sopprimere la traduzione cap-dipendente, plasmando le risposte cellulari allo stress e modulando i programmi di segnalazione di NF-κB e IRF. L’attività di PKR influenza l’apoptosi, gli output legati all’inflammasoma e il crosstalk con le vie MAPK, collegando il riconoscimento dei patogeni a un controllo più ampio dell’espressione genica. Una segnalazione di PKR deregolata è stata associata a infiammazione cronica, suscettibilità virale e alterazioni della proteostasi, rilevanti per modelli di neurodegenerazione e stress metabolico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PKR (rabbit) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari rabbit. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PKR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di PKR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di PKR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PKR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (rabbit) e dal PKR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (rabbit2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PKR Plasmide HDR (rabbit) e il plasmide HDR PKR (rabbit2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.