PKC lambda/iota Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422263

Panoramica

Prkci codifica l’isoforma atipica della protein chinasi C PKC lambda/iota, una chinasi serina/treonina che agisce a valle di complessi di polarità quali PAR3–PAR6 e contribuisce all’instaurarsi della polarità apico-basale, all’organizzazione delle giunzioni serrate e alla divisione cellulare asimmetrica. PKC lambda/iota integra segnali provenienti da vie regolate da PI3K e da piccole GTPasi per coordinare il rimodellamento del citoscheletro, il traffico vescicolare e la morfogenesi epiteliale. Nei modelli murini, un’alterata attività di Prkci è stata associata a un’architettura tissutale compromessa e a programmi di sviluppo e delle cellule immunitarie anomali, rendendolo rilevante per studi sull’integrità epiteliale, la differenziazione e la segnalazione in risposta allo stress. Il suo ruolo centrale nelle vie di controllo della polarità e della crescita collega inoltre la disregolazione di Prkci a meccanismi frequentemente indagati in oncologia e nella ricerca sul metabolismo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PKC lambda/iota (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Prkci in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Prkci insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Prkci a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PKC lambda/iota.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Prkci per lo studio della segnalazione di PKC lambda/iota, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Prkci critici per la funzione di PKC lambda/iota
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Prkci per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PKC lambda/iota CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PKC lambda/iota CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Prkci. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PKC lambda/iota Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PKC lambda/iota (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Prkci per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Prkci definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.