Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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PKC epsilon Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422261
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PKC epsilon Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PKC epsilon, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PKC epsilon Antibody (E-5): sc-1681
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PKC epsilon Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422261 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Prkce codifica la protein chinasi C epsilon (PKCε), una chinasi serina/treonina sensibile al diacilglicerolo che integra segnali provenienti dai fosfolipidi e da vie attivate dai recettori per modulare il comportamento cellulare. PKCε regola reti di fosforilazione che controllano il rimodellamento del citoscheletro, il traffico vescicolare e i programmi di sopravvivenza cellulare, ed è comunemente associata agli output di segnalazione MAPK/ERK e PI3K–AKT in molteplici tipi cellulari. Nei modelli murini, l’attività di Prkce viene studiata nel contesto delle risposte allo stress, della segnalazione infiammatoria e del rimodellamento tissutale, dove un’alterata segnalazione di PKCε può influenzare fenotipi rilevanti per la biologia metabolica e cardiovascolare, oltre che per processi associati ai tumori. Queste connessioni funzionali rendono Prkce un nodo utile per analizzare il cross-talk tra vie guidate da chinasi e la plasticità cellulare dipendente dai segnali.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PKC epsilon (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Prkce in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Prkce insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Prkce a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PKC epsilon.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Prkce per lo studio della segnalazione di PKC epsilon, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Prkce critici per la funzione di PKC epsilon
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Prkce per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PKC epsilon CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PKC epsilon CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Prkce. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PKC epsilon Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PKC epsilon (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Prkce per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Prkce definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.