PKAγ cat Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400874

Panoramica

PRKACG codifica la subunità catalitica gamma della protein-chinasi A dipendente da cAMP (PKAγ), una chinasi serina/treonina che fosforila numerosi substrati per tradurre i segnali del cAMP in risposte cellulari. Attraverso la regolazione da parte delle subunità regolatorie della PKA e delle proteine di ancoraggio delle A-chinasi, PKAγ contribuisce a controllare la compartimentalizzazione del segnale e modula processi quali metabolismo, programmi trascrizionali, dinamica del citoscheletro e attività dei canali ionici. L’attività di questa chinasi si integra con la segnalazione GPCR–adenilil ciclasi–cAMP e con vie a valle come l’espressione genica dipendente da CREB e il cross-talk con le reti MAPK. La disregolazione della segnalazione cAMP/PKA è implicata in diversi fenotipi rilevanti per la malattia, tra cui alterazioni della segnalazione proliferativa, perturbazioni endocrine e metaboliche e cambiamenti dell’eccitabilità neuronale, a sostegno di studi meccanicistici della funzione di PRKACG nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PKAγ cat (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PRKACG in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PRKACG insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PRKACG a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PKAγ cat.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PRKACG per lo studio della segnalazione di PKAγ cat, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PRKACG critici per la funzione di PKAγ cat
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PRKACG per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PKAγ cat CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PKAγ cat CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PRKACG. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PKAγ cat Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PKAγ cat (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PRKACG per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PRKACG definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.