PIPK I α Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403490-LAC

PIP5K1A codifica la fosfatidilinositolo-4-fosfato 5-chinasi di tipo I alfa (PIPK I α), una chinasi lipidica chiave che genera fosfatidilinositolo 4,5-bisfosfato (PI(4,5)P2) a livello della membrana plasmatica e delle endomembrane. Controllando i pool locali di PI(4,5)P2, PIPK I α regola il rimodellamento del citoscheletro di actina, il traffico di membrana e la segnalazione dipendente dai fosfoinositidi, incluse le vie PI3K–AKT e quelle guidate da PLC che influenzano la dinamica del calcio e la produzione di secondi messaggeri. L’attività di PIP5K1A sostiene processi quali migrazione cellulare, adesione ed endocitosi dei recettori attraverso la modulazione delle adesioni focali e delle reti di piccole GTPasi. Un metabolismo dei fosfoinositidi deregolato che coinvolge PIP5K1A è stato associato a fenotipi proliferativi e invasivi alterati ed è spesso oggetto di studio nel contesto della biologia del cancro, della segnalazione nelle cellule immunitarie e della neurobiologia.

Le particelle di attivazione lentivirale PIPK I α (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PIP5K1A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PIPK I α (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PIP5K1A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PIPK I α. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PIP5K1A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.