Pinin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-405373-KO-2

Panoramica

PNN codifica la pinina, una proteina prevalentemente nucleare arricchita nei complessi associati ai desmosomi e all’interno di domini simili a speckles, dove collega lo stato di adesione cellula–cellula all’organizzazione nucleare. La pinina partecipa al processamento del pre‑mRNA interagendo con regolatori dello splicing e componenti del complesso di giunzione degli esoni (exon junction complex), influenzando così programmi di splicing alternativo legati all’identità e alla differenziazione epiteliale. Attraverso questi ruoli, PNN incide sul controllo trascrizionale e post‑trascrizionale di geni che regolano proliferazione, migrazione e risposte allo stress. Un’espressione deregolata di PNN o l’alterazione delle reti di splicing è stata riportata in molteplici contesti tumorali, a supporto della sua utilità nello studio delle dinamiche epitelio–mesenchimali e dei fenotipi guidati dal processamento dell’RNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pinin (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PNN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PNN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PNN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pinin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PNN per lo studio della segnalazione di Pinin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PNN critici per la funzione di Pinin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PNN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pinin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Pinin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PNN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pinin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Pinin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PNN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PNN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.