Pim-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422237

Panoramica

Il gene murino **Pim1** codifica **Pim-1**, una chinasi serina/treonina costitutivamente attiva indotta dalla segnalazione mediata da citochine e fattori di crescita e implicata nel controllo della proliferazione, della sopravvivenza e dell’adattamento metabolico. Pim-1 si integra con gli output delle reti **JAK/STAT** e **PI3K/AKT** e modula la progressione del ciclo cellulare e l’apoptosi tramite la fosforilazione di effettori a valle che influenzano la trascrizione e la stabilità delle proteine. Nei contesti ematopoietici e delle cellule immunitarie, Pim-1 contribuisce allo sviluppo e all’attivazione dei linfociti e la sua deregolazione è frequentemente studiata in modelli di segnalazione oncogena, infiammazione e risposte allo stress. Pim1 è inoltre oggetto di studio per i suoi ruoli nella funzione mitocondriale e nella senescenza cellulare, fornendo collegamenti meccanicistici tra la segnalazione delle chinasi e l’omeostasi tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pim-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pim1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pim1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pim1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pim-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pim1 per lo studio della segnalazione di Pim-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pim1 critici per la funzione di Pim-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pim1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pim-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Pim-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pim1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pim-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Pim-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pim1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pim1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.