PI 3-kinase p110δ Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422232-LAC

Pik3cd codifica la subunità catalitica p110δ della fosfoinositide 3-chinasi di classe I, un enzima chiave che fosforila PIP2 generando PIP3 e propagando la segnalazione PI3K–AKT–mTOR. Nelle linee immunitarie ed ematopoietiche del topo, p110δ contribuisce a collegare gli input dei recettori dell’antigene e dei recettori delle citochine al controllo a valle della sopravvivenza, della proliferazione, del metabolismo e della chemiotassi cellulare, includendo effetti sui programmi trascrizionali dipendenti da NF-κB e FOXO. L’alterazione dell’attività di Pik3cd è ampiamente studiata per il suo impatto sull’attivazione dei linfociti, sulla segnalazione infiammatoria e sull’omeostasi immunitaria, con rilevanza per modelli di disregolazione immunitaria e di rimodellamento oncogenico delle vie di segnalazione. Queste funzioni rendono Pik3cd un nodo utile per analizzare le reti di trasduzione del segnale che determinano le decisioni di destino delle cellule immunitarie.

Le particelle di attivazione lentivirale PI 3-kinase p110δ (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Pik3cd in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PI 3-kinase p110δ (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Pik3cd, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PI 3-kinase p110δ. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Pik3cd e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.