PI 3-kinase p100 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432531

Panoramica

Pik3c3 codifica la subunità catalitica della fosfatidilinositolo 3-chinasi di classe III (spesso indicata come PI 3-chinasi p100/Vps34), che genera fosfatidilinositolo 3-fosfato per controllare l’identità e il traffico delle membrane endosomiali. Nelle cellule di topo, la produzione di PI3P da parte di questa chinasi è fondamentale per l’avvio dell’autofagia, la maturazione endosoma-verso-lisosoma e lo smistamento vescicolare tramite complessi con partner regolatori quali VPS15 e Beclin 1. L’attività di Pik3c3 integra segnali nutrizionali e di stress per coordinare l’omeostasi lisosomiale e il controllo di qualità cellulare, influenzando processi tra cui la proteostasi, il turnover mitocondriale e la segnalazione immunitaria. Le vie endolisosomiali e dell’autofagia deregolate, legate alla funzione di Pik3c3, sono spesso studiate nel contesto della neurodegenerazione, della biologia delle infezioni e del metabolismo delle cellule tumorali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p100 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pik3c3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pik3c3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pik3c3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PI 3-kinase p100.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pik3c3 per lo studio della segnalazione di PI 3-kinase p100, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pik3c3 critici per la funzione di PI 3-kinase p100
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pik3c3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PI 3-kinase p100 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PI 3-kinase p100 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pik3c3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PI 3-kinase p100 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PI 3-kinase p100 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pik3c3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pik3c3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.