PHF5A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407986

Panoramica

PHF5A (proteina con dominio PHD finger 5A) è un componente essenziale del sottocomplesso SF3b all’interno dello snRNP U2, dove supporta il riconoscimento delle sequenze del punto di ramificazione (branch point) e contribuisce a determinare la scelta del sito di splicing durante lo splicing del pre‑mRNA. Attraverso il suo ruolo nell’assemblaggio dello spliceosoma e nella dinamica del complesso di splicing, PHF5A influenza la diversità delle isoforme trascrittomiche e tutela programmi efficienti di espressione genica legati alla progressione del ciclo cellulare e al mantenimento del genoma. L’alterazione della funzione di PHF5A può causare difetti di splicing diffusi, inclusi l’uso aberrante degli esoni e la ritenzione degli introni, rimodellando la proteostasi e le vie di risposta allo stress. Componenti dello spliceosoma deregolati, inclusa PHF5A, sono frequentemente studiati nel contesto dei tumori e di altri disturbi caratterizzati da un’elaborazione dell’RNA alterata e da adattamenti trascrizionali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PHF5A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PHF5A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PHF5A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PHF5A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PHF5A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PHF5A per lo studio della segnalazione di PHF5A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PHF5A critici per la funzione di PHF5A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PHF5A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PHF5A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PHF5A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PHF5A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PHF5A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PHF5A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PHF5A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PHF5A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.