PHF3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406857

Panoramica

PHF3 (PHD finger protein 3) è un regolatore trascrizionale nucleare che si associa alla RNA polimerasi II e contribuisce al controllo dell’allungamento della trascrizione e del processamento dell’RNA co-trascrizionale. Attraverso i suoi domini PHD finger e le interazioni con il macchinario di elongazione, PHF3 influenza programmi di espressione genica legati al mantenimento dello stato cellulare e alla trascrizione in risposta agli stimoli. La perturbazione dell’attività di PHF3 è stata collegata a un’alterata fedeltà trascrizionale e a reti di controllo della crescita deregolate, rendendola rilevante per lo studio dei meccanismi che collegano i fattori associati alla cromatina alla sintesi dell’RNA. PHF3 è quindi di interesse in ambiti di ricerca che spaziano dalla regolazione genica alla differenziazione, fino al rimodellamento trascrizionale associato alle malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PHF3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PHF3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PHF3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PHF3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PHF3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PHF3 per lo studio della segnalazione di PHF3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PHF3 critici per la funzione di PHF3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PHF3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PHF3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PHF3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PHF3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PHF3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PHF3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PHF3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PHF3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.