PGRMC1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401945-NIC

Il componente 1 del recettore del progesterone associato alla membrana (PGRMC1) è una proteina associata alla membrana in grado di legare l’eme, implicata nella segnalazione non classica del progesterone, nel metabolismo degli steroli e nella regolazione dell’attività degli enzimi del citocromo P450. Si localizza prevalentemente nel reticolo endoplasmatico e in altri compartimenti membranosi, dove influenza l’omeostasi lipidica, il traffico vescicolare e le risposte cellulari allo stress, incluse vie collegate alla proliferazione e alla sopravvivenza. PGRMC1 è stato collegato alla biologia riproduttiva e alla regolazione metabolica, e sono stati riportati pattern di espressione alterati in diversi contesti patologici, tra cui la biologia dei tumori e processi neurodegenerativi. Queste caratteristiche rendono PGRMC1 un bersaglio utile per studi meccanicistici della segnalazione del progesterone mediata dalla membrana, della biologia redox/dell’eme e delle reti metaboliche incentrate sul P450.

PGRMC1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PGRMC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PGRMC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PGRMC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PGRMC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.