PGRMC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424690-ACT

O componente 1 do receptor de progesterona na membrana (PGRMC1), codificado pelo gene murino *Pgrmc1*, é uma proteína associada a membranas com capacidade de ligação ao heme, implicada na sinalização por esteroides, na regulação do citocromo P450 e no tráfego de membranas. Localiza-se predominantemente em membranas intracelulares e participa de processos que incluem a homeostase do colesterol, o transporte de vesículas e a modulação de vias de sinalização de receptores e quinases que influenciam a sobrevivência celular e as respostas ao estresse. O PGRMC1 tem sido associado a funções mitocondriais e ligadas ao retículo endoplasmático (RE) e é frequentemente estudado em contextos de remodelamento metabólico, estresse oxidativo e sinalização proliferativa. Foi relatada desregulação de vias associadas ao PGRMC1 em estudos de biologia tumoral, metabolismo hepático e fenótipos neurobiológicos, o que o torna um alvo útil para investigação mecanística em modelos celulares murinos.

PGRMC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pgrmc1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PGRMC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pgrmc1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pgrmc1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PGRMC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pgrmc1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PGRMC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PGRMC1 em células tumorais com expressão de Pgrmc1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.