PGRMC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401945-ACT

Il componente 1 di membrana del recettore del progesterone (PGRMC1) è una proteina di membrana associata in grado di legare l’eme, implicata nella segnalazione degli steroidi, nella regolazione del citocromo P450 e nelle risposte cellulari allo stress ossidativo e metabolico. Nelle cellule umane, PGRMC1 è stata collegata alla modulazione dell’omeostasi dei lipidi e del colesterolo, al traffico delle membrane endocellulari e a processi associati ai mitocondri che influenzano i programmi di proliferazione e sopravvivenza. Partecipa a vie che influenzano il crosstalk tra recettori e la segnalazione mediata da chinasi, con connessioni riportate alle risposte allo stress del reticolo endoplasmatico e all’equilibrio redox. Un’espressione deregolata di PGRMC1 è stata osservata in molteplici contesti rilevanti per la malattia, inclusi oncologia, neurobiologia e fenotipi metabolici, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla segnalazione di membrana e sull’adattamento cellulare allo stress.

PGRMC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PGRMC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PGRMC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PGRMC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PGRMC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PGRMC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PGRMC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PGRMC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PGRMC1 nelle cellule tumorali con espressione di PGRMC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.