PGAM5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401300-ACT

PGAM5（phosphoglycerate mutase family member 5）は、ミトコンドリア外膜に固定された非典型的なミトコンドリアSer/Thrホスファターゼであり、ミトコンドリアの品質管理とストレスシグナル伝達を統合する。PGAM5は、分裂・融合バランスに関わる基質上のリン酸化依存的な事象を制御することで、ミトコンドリアのダイナミクスやマイトファジーを調節し、PINK1/Parkinに連動したミトコンドリアのターンオーバーにも影響し得る。さらにPGAM5は、ネクロプトーシス関連経路を含むレドックスおよび細胞死シグナル伝達とも連関し、酸化ストレスや代謝攪乱に対する細胞応答を形作る。PGAM5の活性や発現の破綻は、バイオエネルゲティクスやストレス適応プログラムの変化を介して、神経変性、心代謝ストレス応答、がん生物学に関与するとされるミトコンドリア機能障害の表現型と関連づけられている。

PGAM5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PGAM5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PGAM5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PGAM5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPGAM5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PGAM5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPGAM5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPGAM5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPGAM5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPGAM5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。