Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PGAM1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404283
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PGAM1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PGAM1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PGAM1 Antibody (6): sc-130334
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PGAM1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-404283 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La fosfoglicerato mutasi 1 (PGAM1) è un enzima glicolitico citosolico che catalizza l’interconversione tra 3-fosfoglicerato e 2-fosfoglicerato, regolando il flusso della glicolisi e l’equilibrio degli intermedi biosintetici a valle. Grazie alla sua posizione in un punto di diramazione chiave del metabolismo centrale del carbonio, PGAM1 sostiene la produzione di ATP e fornisce precursori per vie anaboliche legate alla sintesi di nucleotidi e amminoacidi. Un’attività alterata di PGAM1 è stata associata a una riprogrammazione metabolica e a fenotipi proliferativi, rendendola rilevante per gli studi sul metabolismo tumorale e sul controllo della crescita cellulare. PGAM1 viene inoltre utilizzata come nodo per indagare le connessioni tra glicolisi, omeostasi redox e segnalazione adattativa allo stress.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PGAM1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PGAM1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PGAM1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PGAM1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PGAM1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PGAM1 per lo studio della segnalazione di PGAM1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PGAM1 critici per la funzione di PGAM1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PGAM1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PGAM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PGAM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PGAM1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PGAM1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PGAM1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PGAM1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PGAM1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.