Peroxin 26 Plasmide Double Nickase (h): sc-408486-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Peroxin 26 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Peroxin 26 Double Nickase Plasmid (h) e il Peroxin 26 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PEX26. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Peroxin 26 Antibody (A-9): sc-376817
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Peroxin 26 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408486-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **PEX26** codifica la **perossina 26**, una proteina di membrana dei perossisomi necessaria per la biogenesi dei perossisomi e per il mantenimento dell’importazione delle proteine della matrice. **PEX26** svolge una funzione nella macchina di importazione proteica perossisomiale ancorando alla membrana il complesso di riciclo delle AAA ATPasi (**PEX1–PEX6**), consentendo il turnover del recettore **PEX5** e sostenendo l’importazione dei carichi **PTS1/PTS2**. Attraverso questo ruolo, **PEX26** supporta vie metaboliche lipidiche centrate nei perossisomi, inclusi la β-ossidazione degli acidi grassi a catena molto lunga, la biosintesi dei fosfolipidi eterei (plasmalogeni) e l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno. Varianti patogene di **PEX26** sono associate a disordini della biogenesi perossisomiale nello spettro di **Zellweger**, rendendo **PEX26** un bersaglio chiave per studi meccanicistici della disfunzione d’organoide e dei fenotipi di malattia metabolica.
Peroxin 26 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PEX26 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PEX26. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PEX26. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PEX26 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.