Periostin Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-424463-LAC

Postn codifica per periostina, una proteina matricellulare secreta della matrice extracellulare che lega le integrine e modula l’adesione, la migrazione e la sopravvivenza cellulare durante il rimodellamento tissutale. Nel topo, la periostina contribuisce alla fibrillogenesi del collagene e all’organizzazione della matrice extracellulare, integrando segnali meccanici con vie di segnalazione quali FAK/PI3K–AKT, TGF-β/SMAD e programmi associati a Wnt. È altamente responsiva a lesioni e stimoli infiammatori ed è frequentemente studiata in ambito di fibrosi, osteogenesi, angiogenesi e interazioni tumore–stroma. Alterazioni dell’espressione di Postn e della deposizione di periostina sono collegate a cambiamenti nell’attivazione dei fibroblasti e nel crosstalk epitelio–mesenchimale, rilevanti per fenotipi di rimodellamento cronico.

Le particelle di attivazione lentivirale Periostin (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Postn in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Periostin (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Postn, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Periostin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Postn e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.