Periostin Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424463-ACT

Il gene Postn del topo codifica la periostina, una proteina matricellulare secreta della matrice extracellulare che si lega alle integrine e modula l’adesione cellula–matrice, la migrazione e la meccanotrasduzione. La periostina contribuisce al rimodellamento della matrice extracellulare, alla fibrillogenesi del collagene e all’attivazione di vie di segnalazione che includono FAK/PI3K/AKT, ERK/MAPK e programmi dipendenti da TGF-β. È espressa in modo prominente nei tessuti connettivi ed è indotta durante la riparazione delle ferite e il rimodellamento tissutale, collegando l’attivazione dei fibroblasti ai cambiamenti dell’architettura stromale. Un’espressione deregolata della periostina è frequentemente utilizzata come indicatore molecolare di fibrosi, rimodellamento infiammatorio e stroma associato al tumore nei sistemi modello murini.

Periostin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Postn senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Periostin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Postn nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Postn, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Periostin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Postn nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Periostin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Periostin nelle cellule tumorali con espressione di Postn silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.