Periostin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424463-ACT

O gene **Postn** de camundongo codifica a **periostina**, uma proteína matricelular secretada da matriz extracelular que se liga a integrinas e modula a adesão célula–matriz, a migração e a mecanotransdução. A periostina contribui para a remodelação da matriz extracelular, a fibrilogênese do colágeno e a ativação de vias de sinalização, incluindo FAK/PI3K/AKT, ERK/MAPK e programas dependentes de TGF-β. É fortemente expressa em tecidos conjuntivos e é induzida durante o reparo de feridas e a remodelação tecidual, conectando a ativação de fibroblastos a mudanças na arquitetura do estroma. A expressão desregulada de periostina é frequentemente usada como indicador molecular de fibrose, remodelação inflamatória e estroma associado a tumor em sistemas de modelos murinos.

Periostin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Postn sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Periostin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Postn em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Postn, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Periostin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Postn nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Periostin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Periostin em células tumorais com expressão de Postn silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.