PEPT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401259-NIC

SLC15A1 codifica PEPT1, un trasportatore di oligopeptidi accoppiato ai protoni che media l’assorbimento di di- e tripeptidi e di xenobiotici simili ai peptidi attraverso la membrana apicale delle cellule epiteliali, in particolare nell’intestino tenue. PEPT1 sostiene l’assorbimento dei nutrienti e l’omeostasi dell’azoto cellulare accoppiando il trasporto del substrato al gradiente transmembrana di H+, integrandosi con l’utilizzo degli amminoacidi e con i programmi metabolici dell’epitelio. La sua attività influisce sulla fisiologia della barriera intestinale e sulla differenziazione epiteliale, e un’espressione alterata di SLC15A1 è stata riportata in contesti infiammatori e metabolici che influenzano la gestione dei nutrienti regolata dal trasportatore. Poiché PEPT1 trasporta anche composti peptidomimetici, SLC15A1 funge da modello per lo studio della regolazione dei trasportatori della famiglia SLC, della cinetica del trasporto di membrana e delle risposte dell’epitelio allo stress.

PEPT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC15A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC15A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC15A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC15A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.