Pepsin C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404137

Panoramica

PGC codifica per la pepsina C, un’endopeptidasi aspartica (gastricsina) secreta come zimogeno e attivata in condizioni acide per partecipare alla proteolisi gastrica. Nello stomaco, la pepsina C contribuisce alla digestione delle proteine nel lume e al processamento dei peptidi, operando all’interno di reti di proteasi dipendenti dall’acidità che complementano l’attività della pepsina A. Alterazioni dell’espressione di PGC e dei pattern di secrezione della pepsina C sono state utilizzate come indicatori di cambiamenti nella differenziazione della mucosa gastrica e nell’omeostasi dell’epitelio. La disregolazione dei programmi delle proteasi gastriche viene spesso esaminata nel contesto del rimodellamento infiammatorio e della trasformazione neoplastica del tratto gastrointestinale superiore, supportando studi meccanicistici in modelli cellulari gastrici e in sistemi derivati da tessuti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Pepsin C (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PGC in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PGC insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PGC a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Pepsin C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PGC per lo studio della segnalazione di Pepsin C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PGC critici per la funzione di Pepsin C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PGC per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Pepsin C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Pepsin C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PGC. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Pepsin C Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Pepsin C (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PGC per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PGC definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.