Pendrin Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-401272-LAC-2

Il gene umano SLC26A4 codifica pendrina, uno scambiatore di anioni multipasso che media il trasporto elettroneutro di cloruro, ioduro, bicarbonato e substrati correlati attraverso le membrane epiteliali. La pendrina contribuisce all’omeostasi ionica e del pH nell’orecchio interno, nella tiroide e nel dotto collettore renale, influenzando la composizione dell’endolinfa, la gestione dello ioduro durante la biosintesi degli ormoni tiroidei e la secrezione di bicarbonato accoppiata al riassorbimento di cloruro. L’alterazione genetica di SLC26A4 è fortemente associata alla sindrome di Pendred e a forme sindromiche o non sindromiche di ipoacusia con acquedotto vestibolare allargato, evidenziandone il ruolo nella fisiologia del trasporto epiteliale e nello sviluppo degli organi sensoriali. L’editing genico di SLC26A4 offre un sistema gestibile per analizzare i meccanismi di scambio anionico, la polarità e il traffico intracellulare degli epiteli e le relazioni genotipo–fenotipo in modelli cellulari di organoidi, rene, tiroide o orecchio interno.

Le particelle di attivazione lentivirale Pendrin (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SLC26A4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Pendrin (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SLC26A4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Pendrin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SLC26A4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.