PELP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429042

Panoramica

PELP1 (proteina 1 ricca di prolina, acido glutammico e leucina), codificata dal gene murino Pelp1, è un coregolatore multifunzionale dei recettori nucleari e una piattaforma di assemblaggio associata alla cromatina che integra la segnalazione degli ormoni steroidei con il controllo trascrizionale ed epigenetico. Coordina le interazioni tra la segnalazione del recettore degli estrogeni e i complessi di rimodellamento della cromatina, influenzando la trascrizione dipendente dall’RNA polimerasi II, le modificazioni degli istoni e la progressione del ciclo cellulare. PELP1 interagisce inoltre con vie chinasiche e con le risposte al danno del DNA, collegando segnali dei fattori di crescita ai programmi di espressione genica e al mantenimento del genoma. Un’attività e una localizzazione di PELP1 deregolate sono state associate a proliferazione aberrante, segnalazione endocrina alterata e reti trascrizionali oncogeniche, rendendola rilevante per studi meccanicistici della biologia ormone-responsiva e delle vie associate ai tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PELP1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pelp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pelp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pelp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PELP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pelp1 per lo studio della segnalazione di PELP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pelp1 critici per la funzione di PELP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pelp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PELP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PELP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pelp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PELP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PELP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pelp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pelp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.