Pellino 2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402305-ACT

Il gene umano **PELI2** codifica **Pellino 2**, una ligasi E3 dell’ubiquitina che contribuisce ad accoppiare la segnalazione dei recettori di riconoscimento dei pattern alle risposte infiammatorie e antivirali a valle. Pellino 2 partecipa alla regolazione, dipendente dall’ubiquitina, di complessi adattatori e chinasi nelle vie dei recettori Toll-like e del recettore dell’interleuchina-1, modulando l’attivazione delle vie di segnalazione **NF-κB** e **MAPK** e influenzando la produzione di citochine. Attraverso la modulazione del turnover proteico e dell’ampiezza del segnale, PELI2 contribuisce all’omeostasi dell’immunità innata e alle risposte cellulari allo stress rilevanti per la disregolazione della segnalazione infiammatoria. Un’alterata regolazione dell’ubiquitinazione e delle vie dell’immunità innata che coinvolgono Pellino 2 è stata studiata nel contesto dei meccanismi di malattie immunomediate e delle interazioni ospite–patogeno.

Pellino 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PELI2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Pellino 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PELI2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PELI2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Pellino 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PELI2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Pellino 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Pellino 2 nelle cellule tumorali con espressione di PELI2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.