PEBP2β Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401983-ACT

CBFB codifica la subunità beta del core-binding factor (PEBP2β), un partner che non si lega al DNA e che eterodimerizza con i fattori di trascrizione della famiglia RUNX per aumentare il legame al DNA e stabilizzare i complessi trascrizionali. Questo asse RUNX/CBFβ regola programmi di espressione genica specifici di linea, centrali per l’ematopoiesi, la differenziazione immunitaria, l’osteogenesi e il controllo del ciclo cellulare. La trascrizione dipendente da CBFB influenza vie che governano lo sviluppo mieloide e linfoide, gli output della segnalazione delle citochine e la maturazione delle linee scheletriche e stromali. La disregolazione di CBFB, incluse riarrangiamenti cromosomici e interazioni alterate con RUNX, è implicata nella biologia delle neoplasie ematologiche e in fenotipi dello sviluppo, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici del controllo trascrizionale.

PEBP2β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CBFB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PEBP2β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CBFB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CBFB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PEBP2β. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CBFB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PEBP2β nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PEBP2β nelle cellule tumorali con espressione di CBFB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.