PEA3 Plasmide Double Nickase (h): sc-401704-NIC

ETV4 codifica il fattore di trascrizione della famiglia ETS PEA3, un regolatore legante il DNA che integra segnali guidati da MAPK/ERK per controllare programmi genici coinvolti nella proliferazione cellulare, nella differenziazione, nella transizione epitelio–mesenchimale e nella migrazione. PEA3 modula la trascrizione a valle delle tirosin-chinasi recettoriali e coopera con AP-1 e altri cofattori per regolare bersagli legati al rimodellamento della matrice extracellulare e a fenotipi associati all’invasione. Un’espressione o un’attività deregolata di ETV4 è frequentemente associata a stati di segnalazione oncogenica e a un comportamento metastatico alterato in molteplici contesti tumorali, rendendolo un nodo rilevante per lo studio del controllo trascrizionale della progressione tumorale. Inoltre, ETV4 partecipa a programmi di sviluppo e di specificazione di linea, supportandone l’impiego in studi meccanicistici delle transizioni di stato cellulare.

PEA3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ETV4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ETV4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ETV4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ETV4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.